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扩增仪维修要多久完成工作

时间:2024-05-19 13:00118 人浏览举报
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  • 佰柠
    佰柠
    2024-05-19 13:00

    PCR这项技术是由凯利·穆利斯(Kary Mullis)发明,并因此在七年之后,1993年10月,获得了诺贝尔化学奖该项殊荣。穆利斯的想法是,利用一种人工方法,和反复相同程序的方法,并利用一种特殊的酶——即DNA聚合酶来扩增特定的DNA片段。

    DNA聚合酶天然存在于生物体内,在细胞分裂前进行DNA的复制。当DNA开始复制时,解旋酶将双股的DNA分开成两个单股。DNA聚合酶便结合在两DNA单股链上,生成互补链。在穆利斯最初的PCR反应中,将DNA聚合酶用于体外试验。双链DNA被加热到96℃,使得双链分离成为两条单链。但是在这个温度下,DNA聚合酶被破坏,因此在每个循环的加热步骤后必须补充新的聚合酶。穆利斯的原始PCR反应效率极低,需要大量时间和DNA聚合酶,并且在整个PCR反应中都需要人来照看。

    后来,由嗜热细菌水生栖热菌(Thermus aquaticus)体内产生的DNA聚合酶改善了这种低效的PCR反应。由于嗜热细菌生活在温度达到50至80 °C (122至176 °F)的间歇泉中,它的DNA聚合酶具有耐热性。在用于PCR反应时,高温并不能破坏这种DNA聚合酶,因此不需要不断加入新的聚合酶,PCR反应由此变得简单并且可以由机器操作。

    最初的具有耐热性的DNA聚合酶来自于水生栖热菌(Thermus aquaticus),因此被称为Taq。Taq酶被广泛用于当前的PCR操作中。Taq酶的缺点是它缺少3->5校正外切酶活性,因此在复制DNA时有时会出错,造成DNA序列突变(错误)。从古菌中获得的Pwo酶及Pfu酶均有校正机制,能够大大降低PCR反应中的突变。将Taq与Pfu结合使用可以保证真实准确得扩增DNA。

  • 爱笑的maggie
    爱笑的maggie
    2024-05-19 13:00

    样品规格 0.2ml×96孔、12×8联排管、96微孔板、0.5ml×77孔 控温模式 基座BLOCK模式、管内TUBE模拟计算模式 反应体积 10-100ul 温控范围 0--99.9℃ BLOCK升降温速率(Max.) ≥4℃/sec 样品升降温速率(Max.) ≥3.5℃/sec 温度显示精度 ±0.1℃ 温度准确度 ±0.2℃ 温度均匀性 ±0.2℃ 可记忆程序数目 800 最大程序段数 6 最大温阶步数 16 最大循环次数 99 最大保温时间 99分59秒或长时间保温 温度递增/递减幅度 0~30℃可选 时间递增/递减幅度 0~60s可选 Tm计算器 Yes 单文件内可设置多个循环 Yes 多文件连接 Yes 可调节式热盖 Yes 停电保护功能 Yes 产品外形尺寸 29cmX24cmX25cm 产品重量 7kg 使用环境 温度5--40℃;相对湿度≤80% 使用电源 AC220X(1±10%)V 50X(1±10%)Hz,1100VA

  • 衍星辰
    衍星辰
    2024-05-19 13:00

    基因扩增仪1. PCR引物设计:引物设计可能是PCR扩增成功最关键的因素。如引物设计欠佳,可能导致扩增产物不足,甚至扩增失败,其原因是设计欠佳的引物可导致非特异扩增和/或形成引物二聚体,此又成为PCR反应的竞争性产物,从而进一步抑制PCR产物形成。在引物设计时必须考虑以下几个因素,其中最重要的是引物长度、溶解温度(Tm)、特异性、引物序列互补问题、G/C 含量和多嘧啶(T,C) 或多嘌呤(A, G)延伸、3’-末端序列等。 (1)引物长度:由于PCR反应的特异性、退火温度以及时间均至少部分与PCR引物长度相关联,因此引物长度是PCR扩增是否成功关键的因素。一般PCR引物长度为15-30核苷酸。(2)溶解温度(Tm):因加热而断开H键,使双链DNA分开或“溶解”为单链DNA。溶解温度(Tm)即指使一半双链DNA变为单链DNA的温度。Tm可采用下列公式计算:Tm=2(A T) 4(G C)。需注意PCR反应至少有两个(一对)引物,两个寡核苷酸引物Tm 值应比较接近,不可差异过大。因有较高的Tm值的引物在较低的反应温度时可发生错配,而引物Tm值较低,反应温度较高时则可能不能发生作用,因此如引物的Tm值差异较大,可导致PCR扩增效率低下甚至扩增失败。(3)引物序列互补:设计引物时应绝对没有3个碱基以上的内引物配对,如引物有这样具有自我配对的区域,“弹回”即部分双链结构将发生在退火反应时。(4)G/C 含量和多嘧啶(T,C) 或多嘌呤(A, G)延伸:待选择的引物序列应尽可能是碱基随意分布,G C含量平均-避免长A T和富含G C的区域。在引物的碱基组成中GC含量一般为45%-55%。在选择的引物序列中应没有多G 或多C延伸,因其可促进非特异性退火,多A 和多T延伸也应避免,因其可“呼吸”和使引物-模板复合物展开延伸,降低扩增的效率。同时多嘧啶(T,C)和多嘌呤(A,G)延伸也应被避免。 (5)3’-末端序列:为控制引物错配,应认真地确定PCR引物中3’末端的位置。应重视PCR引物设计,设计PCR引物时应认真小心。对于一个成功的PCR来说,几个重要因素如引物长度、GC含量和3’序列必须优化。理想的引物应为差不多随意分布的核苷酸混合、GC含量50%、长度约为20个碱基,因此能使Tm值处于56-62�0�2C范围。分析靶基因潜在引物位点时,应考虑无单聚合体, 没有明显的二级结构形成的倾向,不自我互补,与其他双链靶基因序列没有明显的同源性。为避免枯燥无味的设计,节省时间,减少错误,可应用计算机程序优化设计、选择、确定寡核苷酸引物。

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